栉孔扇贝外套膜酸性和碱性磷酸酶电镜细胞化学研究

采用电镜细胞化学技术对栉孔贝（Chlamys farreri）外套膜中的酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）进行了定性定位研究。结果表明，外套膜的所有上皮细胞和结缔组织中部分务细胞呈ACP强阳性。上皮细胞中高电子密度阳性颗粒多为圆形，直径300－450mm；内多也呈ACP强阳性；微绒毛等呈弱阳性。血细胞中次级溶酶体内有数目和大小不同的ACP强阳性颗粒；内质网等内膜系统呈ACP弱阳性。外套膜的所有上皮细胞和血细胞均呈AKP强阳性。AKP阳性颗粒常沿着细胞膜分布；内质网等内膜系统呈AKP强阳性；上皮细胞中一种近圆形直径约250－420nm的颗粒也呈AKP强阳性。     

栉孔扇贝四倍体幼虫的诱导研究

以栉孔扇贝Chlamys farreri为材料，采用浓度为0．5mg／L的细胞松弛素B(CB)处理、抑制受精卵第一极体排放的方法，进行四倍体诱导研究。5次重复实验结果表明，诱导组和对照组的平均受精率分别为45．0％和56．6％，D形幼虫的平均孵化率分别为5．3％和51．1％。经胚胎和幼虫发育观察发现，在诱导组中异常原肠胚的比例高于对照组；受精后48h，诱导组的滞育担轮幼虫的比例显著高于对照组。在受精后48h采用流式细胞术检测孵化的D形幼虫，诱导组中四倍体幼虫的比例为36％-70％，平均为49％，同时发现了平均比例为31％的三倍体幼虫。本研究表明，该项技术能有效地诱发栉孔扇贝四倍体幼虫，但面临四倍体幼虫孵化率低的问题，今后应设法提高四倍体胚胎和幼虫的发育水平。     

Total carotenoid differences in scallop tissues of Chlamys nobilis (Bivalve: Pectinidae) with regard to gender and shell colour

The aim of this study was to investigate whether total carotenoid content (TCC) in noble scallop Chlamys nobilis is related to body tissue, shell colour, and gender. TCC was determined by a UV–vis recording spectrophotometer in tissue of gonad, adductor, mantle, and gill separately sampled from male and female individuals with orange and brown shell colours from the same cultured population. TCC was significantly different among body tissues, depending on shell colour and gender, ranging from 0.73 to 59.85 μg g⁻¹. In general, TCC was greater in the order of gonad > mantle > adductor > gill. In the same gender, orange shell colour individuals contained significantly higher TCC than brown ones in all four tissues (P < 0.05). In the same shell colour, female contained significantly higher TCC than male in gonad and adductor tissues (P < 0.05).     

栉孔扇贝种群的遗传变异分析

采用不连续聚烯酰胺凝胶电泳技术研究了中国栉孔扇贝和日本栉孔扇贝两个天然种群的六种同工酶。结果表明,两个种群具有基本相同的基因位点控制同工酶的表达,二者都具有居群内的个体差异,中国和日本的两个种群的多态位点比例（P．99）分别为41．18％和45．45％,平均杂合度观测值（Ho)分别为0．1295和0．1531,平均杂合度预期值（He)分别为0．1695和0．2331,各位点平均等位基因数（Ne)分别为1．5294和1．6363。日本栉孔扇贝自然种群的遗传变异明显高于中国栉孔扇贝自然种群。同时各群体中普遍存在杂合子缺失现象。     

免疫多糖对栉孔扇贝血淋巴中氧化酶活力的影响

于栉孔扇贝体中分别注射酵母聚糖和硒多糖两种免疫多糖后,分别测定了栉孔扇贝血清和血细胞中两种参与免疫防御的酚氧化酶（PO）和髓过氧物酶（MPO）的活力。结果表明,注射酵母聚糖后,血清中PO活力仅在1h时实验组极显著地高于对照组,而血细胞中无PO活力,注射硒多糖后,血清中PO活力在1和15h时时显著高于对照组,而血细胞中未检测到PO活力：血清中MPO活力在1、15和30h时,血细胞中MPO活力在1和15h时实验组显著高于对照组,说明酵母聚糖和硒多糖两种免疫多糖对栉孔扇贝血淋巴中PO和MPO的活力均有增强作用。     

栉孔扇贝营养物的提取与分析

目的:水提法提取栉孔扇贝中营养物质并测定其多糖、牛磺酸和胆碱的含量。分析营养物提取率与牛磺酸、胆碱、多糖含量的关系。方法:超声波破碎组织法;水提法提取栉孔扇贝中营养物质;苯酚-硫酸显色法测定多糖;乙酰丙酮-甲醛显色法测定牛磺酸;雷氏盐沉淀比色法测定栉孔扇贝中胆碱的含量。结果:当1g组织加30ml水并用超声破碎时,水提物出率最高达23%;多糖在栉孔扇贝水提物中的含量达3.60%～15.09%;牛磺酸的含量为1.13%～1.25%;胆碱的含量为0.31%～0.38%。结论:栉孔扇贝中营养物的提取率受各种提取条件影响较大;营养物中的牛磺酸、胆碱含量受各种提取条件影响不大,而多糖的含量则较大。并且,牛磺酸、胆碱、多糖的含量与营养物提取率不呈正相关。     

扇贝多肽(PCF)抑制紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡

建立了紫外线A和B辐射诱导的永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡的模型,采用四甲基偶氮唑盐法、琼脂糖凝胶电泳、流氏细胞仪、酶化学方法和蛋白印迹等技术,研究了扇贝多肽(PCF)抑制紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制。实验发现,PCF可明显抑制紫外线A和B诱导的HaCaT细胞凋亡。1.42~5.68mM剂量范围内PCF剂量依赖性抑制紫外线诱导的HaCaT细胞内活性氧的生成,并能提高细胞内抗氧化酶活性,增强细胞总抗氧化能力,减少脂质过氧化产物的产生;同时,PCF也抑制细胞内JNK蛋白的磷酸化及Caspases-3蛋白的活化。通过加入ROS、JNK和Caspase-3抑制剂证实,PCF作为抗氧化剂减少了细胞内ROS的生成并提高了细胞内抗氧化酶活性,进而阻断了ROS→JNK→Cas-pase-3信号级联反应,抑制了紫外线辐射诱导的HaCaT细胞凋亡。     

华贵栉孔扇贝全脏器中糖胺聚糖的分离提取及其抗肿瘤活性研究

以湛江地区盛产的华贵栉孔扇贝全脏器为原料，经木瓜蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶双酶水解．醇沉后得到华贵栉孔扇贝糖胺聚糖粗品，采用MTT法检测粗品体外对人宫颈癌细胞（Hela）活性的影响。实验结果表明：采用双酶水解法粗品得率为1.26%，总糖含量为41．4％，糖胺聚糖（GAG）含量为26．90／0。粗品具有对Hela肿瘤细胞的生长显著性抑制作用（p〈0．05）。     

急性病毒性坏死症病毒在栉孔扇贝不同器官的感染状况

应用超薄切片、负染电镜技术以及ELISA对自然发病和人工感染发病的栉孔扇贝之外套膜、鳃、肝胰腺、肾、肠、及闭壳肌等主要器官急性病毒性坏死症(Acute Virus Necrobiotic Disease，AVND)病毒的感染状况进行了研究。三种检测方法均表明，病贝的外套膜及肝胰腺为AVND病毒感染最严重的器官，肾以及肠组织次之，鳃及闭壳肌病毒感染程度最轻。本结果同时表明，AVND病毒在病贝体内广泛分布，侵染的细胞主要为上述器官皮下肌细胞的细胞质内，侵染细胞超微结构表现为生物膜肿胀，并出现“髓袢样”结构等病理变化。     

栉孔扇贝的急性病毒性坏死症(AVND)病毒多克隆抗体的制备及ELISA分析

以青岛太平角养殖海区患病栉孔扇贝组织中提纯的急性病毒性坏死症病毒作为抗原，制备出效价较高的多克隆抗体。用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法对青岛黄岛等不同养殖海区、不同时间采集的栉孔扇贝材料进行检测，结果表明，7、8月份样品检测结果呈强阳性，检出阳性率为75％～95％，其他时期阳性率较低。